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猫三联疫苗的工艺与应用


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随着现代家庭中宠物猫数量崛起,带来了空前繁荣的“猫经济”,数据显示,2022年宠物猫数量增加至6536万只,未来还会持续增长。与此同时猫传染病的预防与防疫显的尤为重要。其中猫杯状病毒病、猫病毒性鼻气管炎、猫泛白细胞减少症是猫的重要传染病,可导致猫呼吸道和肠道等疾病发生,会造成猫的跋行、流产、慢性胃肠炎等,严重的情况下,甚至导致死亡。


疫苗则是预防这些疾病最好的方式,针对这三种疾病的疫苗已有上市产品在售。


猫三联疫苗一般是指可以同时预防疱疹病毒,杯状病毒,猫泛白细胞减少病毒(猫瘟)的三合一灭活疫苗,也就是一种疫苗可以对抗三种病毒;已上市产品-硕腾的妙三多,从推荐的免疫程序上,需要打四针。具体免疫程序可见下面。


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图片来源于网络

目前国内外的企业在猫三联疫苗的开发上均有显著的进展,以下是“猫三联”疫苗的开发进度。其中已有多家动物疫苗单位与百林科在下游的工艺开发和生产中有合作。


表1.png



以下简单列举猫三联疫苗的一些典型工艺路线:

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其中制备猫三联常用的细胞系为猫肾细胞F81或者CRFK细胞,属于贴壁培养型细胞,经过培养的病毒进行相应的下游澄清过滤以及超滤等方式进行初纯,其次用层析法进一步降低目标物中的杂质残留,如HCP,HCD等进一步减少副反应。


常见的猫瘟病毒普遍在18nm以上,可以通过专门为病毒或者大分子设计的一款复合模式层析填料MaXtar® COLL400流穿模式进行有效的纯化,该方法操作条件灵活,工艺相对容易重复和执行,且不需要过多的参数摸索,目前有多款人用疫苗和兽用疫苗使用类似的复合模式填料进行了商业化生产。



MaXtar® COLL 400 在猫三联疫苗纯化中的应用(不同流速的影响研究):

  • 柱子信息:16*16.7cm  CV:33.4ml

  • Buffer:20mM PB+0.1M Nacl pH 6.5

分别采用330cm/h,150cm/h,60cm/h 的流速进行上样。


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结论:此三次实验分别采用330cm/h,150cm/h,60cm/h 的流速进行上样,回收率均达到预期,MaXtar® COLL 400 在低流速情况下同样能保证回收率,并在100L规模放大生产中达到预期结果。



MaXtar® COLL 400/700产品简介

独特的双层结构设计,外壳是多孔的钝化层 ,确保 400 KD或700 KD 以上的大分子不会进孔,直接走外水流穿;核心是偶联了同时具有疏水和吸附负电荷作用基团的球形内核,最大程度结合宿主蛋白、 核酸等杂质。具有明显优势:

  • 以流穿模式处理400 KD 或700 KD 以上的大分子,工艺优化更容易,更方便线性放大。

  • 改良的MaXtar® 基架具有更强刚性,因此在较低的反压下能够实现更高工艺流速,提高工艺效率。

  • 相比于传统的凝胶过滤层析,拥有更大的上样量,更高流速,生产效率大大提升。

  • 耐受范围广,化学稳定性好。

  • 适用于病毒及类病毒颗粒等生物大分子分离。


MaXtar® COLL 400/700应用过程中的Tips

为最大程度发挥COLL系列内部的多种配基吸杂效果,建议在缓冲液中添加100~150mM NaCl。

◆ 由于杂质与内部配基之间的高效多模式结合,需要对填料进行有效清洁,建议使用1M NaOH, 30%异丙醇。

◆ 不推荐使用柠檬酸盐缓冲液,因为柠檬酸离子会与配基相互作用。


点击查看 MaXtar® COLL 多模式填料系列 完整资料

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